受控提取供试液的法同前处理:取上述材料提取液2ml于10ml具塞刻度试管中,用甲醇稀释至4ml,时测即得受控提取供试液,定医同法制备空白溶液。用橡
模拟提取供试液的胶中加剂制备:(1)胶塞:以模拟溶剂I~Ⅳ为提取溶剂,分别按每西林瓶10ml灌装,种添加待测胶塞,法同压铝盖,时测倒立放置,定医121℃高压灭菌lh,用橡放冷至室温,胶中加剂将各提取液分别合并至烧杯内,种添得胶塞供试液I~Ⅳ,法同同法制备空白。时测(2)EPDM卡箍密封圈:以模拟溶剂I~Ⅳ为提取溶剂,定医将EPDM卡箍密封圈装入管道中,灌装,密封,60℃高温烘箱放置24h,取出放冷,得EPDM卡箍密封圈供试液I~Ⅳ,同法制备空白。
模拟提取供试液的前处理:取上述模拟提取供试液I~Ⅲ各25ml,分别加入6mol/L盐酸溶液20、40、80μl,调至pH1.8~2-3,混匀。取甲醇、水各5ml依次活化固相萃取小柱,提取液以流速1.5~2ml/min通过固相萃取小柱,取水20m1淋洗,甲醇4ml洗脱,收集洗脱液于5ml具塞刻度试管,用甲醇定容,即得。取供试液Ⅳ10ml,加入6mol/L盐酸溶液100μl,调至pH1.2~1.5,加入氯化钠4g吸水,加入甲基叔丁基醚2ml,涡旋3min,取上清液于10ml具塞刻度试管中,萃取3次,合并上清液,40℃水浴,氮吹至0.5ml,甲醇定容至2m1,即得。制得模拟提取加标供试液Ⅰ~Ⅲ,同法制备空白溶液,色谱柱TC-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相A为5mmol/L磷酸二氢钾溶液,B为乙腈:甲醇(9:1),梯度洗脱(旺8min,A75%;8-12min,A75%-40%:12-25min,A40%:25-27min,A40%-75%;27L-35min,A75%);流速1.0ml/min;柱温40℃;检测波长300nm;进样量20μl。记录峰面积,计算目标化合物在3种提取溶剂中的平均回收率(,n=3),结果见表3。(2)取模拟溶剂Ⅳ10ml,加入低浓度对照品溶液8、20、40μl,摇匀,制得低、中、高浓度加标溶液,受控提取供试液的制备:取橡胶材料约1.0g,剪碎,置于中硼硅玻璃瓶内(规格100m1),加入二氯甲烷40ml后密封,(16士5)℃超声波水浴提取30min,取出放冷,过滤,采用适量二氯甲烷荡洗容器,滤液及洗液置于100ml量瓶中,同法提取2次,合并滤液并定容,得材料提取液。
受控提取供试液的前处理:取上述材料提取液2ml于10ml具塞刻度试管中,用甲醇稀释至4ml,即得受控提取供试液,同法制备空白溶液。
模拟提取供试液的制备:(1)胶塞:以模拟溶剂I~Ⅳ为提取溶剂,分别按每西林瓶10ml灌装,加待测胶塞,压铝盖,倒立放置,121℃高压灭菌lh,放冷至室温,将各提取液分别合并至烧杯内,得胶塞供试液I~Ⅳ,同法制备空白。(2)EPDM卡箍密封圈:以模拟溶剂I~Ⅳ为提取溶剂,将EPDM卡箍密封圈装入管道中,灌装,密封,60℃高温烘箱放置24h,取出放冷,得EPDM卡箍密封圈供试液I~Ⅳ,同法制备空白。
模拟提取供试液的前处理:取上述模拟提取供试液I~Ⅲ各25ml,分别加入6mol/L盐酸溶液20、40、80μl,调至pH1.8~2-3,混匀。取甲醇、水各5ml依次活化固相萃取小柱,提取液以流速1.5~2ml/min通过固相萃取小柱,取水20m1淋洗,甲醇4ml洗脱,收集洗脱液于5ml具塞刻度试管,用甲醇定容,即得。取供试液Ⅳ10ml,加入6mol/L盐酸溶液100μl,调至pH1.2~1.5,加入氯化钠4g吸水,加入甲基叔丁基醚2ml,涡旋3min,取上清液于10ml具塞刻度试管中,萃取3次,合并上清液,40℃水浴,氮吹至0.5ml,甲醇定容至2m1,即得。制得模拟提取加标供试液Ⅳ,同法制备空白溶液,按色谱柱TC-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相A为5mmol/L磷酸二氢钾溶液,B为乙腈:甲醇(9:1),梯度洗脱(旺8min,A75%;8-12min,A75%-40%:12-25min,A40%:25-27min,A40%-75%;27L-35min,A75%);流速1.0ml/min;柱温40℃;检测波长300nm;进样量20μl,记录峰面积,计算目标化合物在15%乙醇中的平均回收率(n=3),结果见表3,各目标化合物在模拟介质中的回收率良好,符合方法学验证要求。
本研究建立了HPLC法测定医用橡胶中4种添加剂,以胶塞作为医用橡胶代表性材料,考察了胶塞中2在不同提取溶剂、提取方法、提取温度下的提取量,确定了不同用途材料的最佳受控提取条件。
二氯甲烷可使材料发生充分溶胀,使可提取物快速、充分释放。超声与回流提取效果相当,且超声温度对提取效率的影响不显著。通过对胶塞和EPDM卡箍密封圈进行受控提取,发现1、2、4均从材料基体中溶出,存在浸出风险,需进行进一步的模拟提取。在模拟提取试验中,1、2浸出量在15%乙醇溶液中浓度最高,说明1、2在脂溶性强的药物制剂中迁移的风险较大。此外,2的浸出量与介质的pH呈现一定相关性,在氢氧化钠溶液(pH11.0)中浸出量较高,说明在碱性环境中,2可能更容易浸出。
在整个药品生命周期内,医用橡胶与药品接触情况(震荡、高温、辐照等)多样,药品处方中的辅料同样可能与橡胶发生相互作用。理想的相容性研究,应选用具体的药物处方或空白药物处方(不含主药)作为提取溶剂。然而,市面上药物品种繁多,合理的模拟提取试验将会大大减少相容性研究的工作量。本研究考察了药品pH值、脂溶性对医用橡胶中4种添加剂浸出量的影响。根据不同用途橡胶,模拟其与药品的接触情况,选用灭菌和高温提取作为胶塞和EPDM卡箍密封圈的模拟提取条件,为药品与医用橡胶的相容性研究提供了参考。
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